Sau khi sử dụng hydrogen peroxide (đặc biệt là hydrogen peroxide VHP hóa hơi) để khử trùng và khử trùng trong tủ an toàn sinh học, việc giám sát và xác minh kết quả một cách khoa học và nghiêm ngặt là cách duy nhất để khẳng định hiệu quả của việc khử trùng, cũng như các yêu cầu cốt lõi về kiểm soát chất lượng và tuân thủ quy định. Đây không chỉ đơn giản là quy trình 'chạy thiết bị' mà là một quy trình- khép kín đòi hỏi nhiều bằng chứng vật lý, hóa học và sinh học.
Sau đây là phân tích có hệ thống về các kỹ thuật giám sát và xác nhận.
Nguyên tắc cốt lõi: Hệ thống xác minh ba lần
Việc xác nhận đầy đủ phải bao gồm "giám sát thông số quy trình", "chỉ báo hóa học" và "thử thách thử thách chỉ báo sinh học", tất cả đều bổ sung cho nhau và không thể thiếu.
Giám sát tham số quy trình (giám sát-thời gian thực để đảm bảo các điều kiện đáp ứng tiêu chuẩn)
Đây là tuyến phòng thủ đầu tiên để xác minh, bao gồm việc ghi lại-thời gian thực các thông số vật lý và hóa học quan trọng thông qua các cảm biến của thiết bị, chứng minh rằng chu trình khử trùng hoạt động trong phạm vi thông số hiệu quả và đã đặt.
Các thông số giám sát:
Nồng độ hơi hydro peroxide (ppm): thông số quan trọng nhất. Nó phải đạt được và duy trì ở nồng độ mục tiêu đã xác định trước (ví dụ hàng trăm ppm) trong một khoảng thời gian đủ. Nồng độ thấp có thể dẫn đến thất bại trong quá trình khử trùng.
Độ ẩm tương đối (% RH): được kiểm soát ở mức thấp (thường<40%) to ensure that VHP is in an efficient "micro condensation" state rather than large droplet condensation. Excessive humidity can dilute disinfectants and may damage equipment.
Nhiệt độ: Theo dõi nhiệt độ của buồng, ảnh hưởng đến áp suất hơi bão hòa và quá trình ngưng tụ.
Áp suất/luồng khí: Đảm bảo buồng được bịt kín và sự lưu thông khí diễn ra bình thường.
Thời gian tiếp xúc: Khoảng thời gian duy trì ở nồng độ mục tiêu.
Cách thực hiện:
Tự động hoàn thiện bởi các cảm biến và hệ thống điều khiển được tích hợp trong máy phát VHP.
Yêu cầu chính: Thiết bị phải có khả năng tạo và lưu trữ các biểu đồ dữ liệu tuần hoàn hoàn chỉnh (đường cong thời gian nồng độ, đường cong nhiệt độ và độ ẩm), cần được đưa vào như một phần của báo cáo xác nhận. Bất kỳ sai lệch tham số nào so với phạm vi đặt trước sẽ dẫn đến cảnh báo hoặc chấm dứt vòng lặp.
Các chỉ số hóa học (kết quả trực quan theo thời gian thực/định tính/bán định lượng)
Được sử dụng để xác định nhanh chóng và trực quan xem một vật phẩm có tiếp xúc với môi trường khử trùng bằng hydro peroxide hay không và có thể gián tiếp phản ánh liệu liều lượng có đủ hay không.
Loại và nguyên tắc:
Loại nhãn Thẻ chỉ thị hóa học: Chứa thuốc nhuộm nhạy cảm với hydrogen peroxide. Khi tích lũy đủ lượng hydrogen peroxide (nồng độ x thời gian), những thay đổi không thể đảo ngược từ màu này sang màu khác sẽ xảy ra.
Vị trí đặt: Nên đặt ở vị trí khó tiếp cận khử trùng nhất, chẳng hạn như:
Góc sâu nhất của không gian làm việc trong tủ an toàn.
Bên trong kênh thoát nước.
Mối nối giữa bộ lọc và khung lắp đặt (nếu khả thi).
Ống xả bên trong (nếu được che phủ bằng chất khử trùng).
Chức năng và hạn chế:
Chức năng: Cung cấp kết quả ngay lập tức để giải phóng nhanh chóng; Xác nhận rằng hơi nước đã được phân phối đến địa điểm được chỉ định; Là mã định danh để phân biệt giữa các mục "đã xử lý" và "chưa xử lý".
Hạn chế: Chỉ có thể chứng minh được sự phơi nhiễm, không thể chứng minh được sự vô trùng. Sự thay đổi màu sắc chỉ cho thấy đã đạt đến ngưỡng liều tối thiểu chứ không đảm bảo tiêu diệt hết vi sinh vật.
Thử nghiệm thử thách chỉ thị sinh học (bằng chứng định lượng, hiệu quả cuối cùng)
Đây là tiêu chuẩn vàng của việc xác minh và bằng chứng quyết định. Bằng cách sử dụng các bào tử vi sinh vật đã được tiêu chuẩn hóa với khả năng kháng khuẩn cao đã được chứng minh trực tiếp rằng quy trình khử trùng đủ để tiêu diệt những vi sinh vật khó tiêu diệt nhất.
Lựa chọn chỉ tiêu sinh học:
Chủng tiêu chuẩn: Bào tử Geobacillus stearothermophilus. Đây là loại vi khuẩn thử nghiệm tiêu chuẩn được quốc tế công nhận có khả năng kháng hydrogen peroxide mạnh nhất.
Dạng vật mang: thường là dạng dải giấy màu dạng giọt bào tử, tấm thép không gỉ hoặc được lắp đặt trên một vật mang cụ thể.
Số lượng bào tử đã biết: Mỗi chất chỉ thị sinh học chứa một số lượng bào tử đã biết, thường là 10^5 đến 10^6 CFU (đơn vị hình thành khuẩn lạc).
Chiến lược vị trí (bước quan trọng nhất):
Vị trí: Nó phải được đặt ở "điểm lạnh nhất" nơi việc khử trùng khó khăn nhất hoặc nơi khí khó xâm nhập nhất. Đối với tủ an toàn sinh học, các vị trí được khuyến nghị bao gồm:
Dưới bàn làm việc, ở góc gần lưới tản nhiệt phía trước.
Điểm nối giữa bức tường phía sau và bàn làm việc.
Ở mặt sau hoặc trong các khoảng trống của dụng cụ bên trong như giá đỡ pipet.
Nếu phạm vi xác minh bao gồm phần bên trong của van xả hoặc đường ống.
Số lượng: Sử dụng ít nhất 3 chỉ thị sinh học và bao gồm một đối chứng dương tính chưa được xử lý.
Quá trình kiểm tra và giải thích:
Phơi nhiễm: Thực hiện chu trình khử trùng VHP hoàn chỉnh với tủ BI.
Tái chế và trồng trọt:
Sau khi chu trình hoàn tất, loại bỏ BI trong điều kiện vô trùng.
Đặt nó vào ống thu hồi chuyên dụng chứa môi trường nuôi cấy.
Ủ trong tủ ấm 56-60 độ C trong 24-48 giờ (thời gian cụ thể theo hướng dẫn).
Đồng thời nuôi cấy đối chứng dương (không tiệt trùng) và đối chứng âm (môi trường nuôi cấy vô trùng).
Giải thích kết quả:
Xác minh thành công: Tất cả môi trường nuôi cấy BI đã khử trùng vẫn trong (không bị đổi màu/đục), cho thấy không có bào tử sống sót. Đối chứng dương tính phải cho thấy sự phát triển tích cực (môi trường nuôi cấy bị chuyển sang màu vàng/đục) và đối chứng âm tính phải trong suốt.
Xác minh không thành công: Bất kỳ BI đã xử lý nào có biểu hiện phát triển (màu vàng/đục) đều cho thấy chu trình khử trùng đã thất bại. Cần điều tra kỹ lưỡng các nguyên nhân (như lỗi tham số, vị trí, trục trặc của thiết bị, vấn đề bịt kín, v.v.), điều chỉnh kế hoạch và tiến hành xác minh lại toàn bộ.
Chu kỳ và loại xác minh
Xác minh đầu tiên:
Sau khi lắp đặt thiết bị VHP hoặc khử trùng lần đầu loại tủ an toàn mới phải tiến hành.
Đây là quá trình xác minh toàn diện nhất, đòi hỏi phải xác định 'điểm lạnh nhất' và thiết lập các tham số vòng lặp hiệu quả.
Tái xác nhận thường xuyên:
Thường được tiến hành sáu tháng một lần hoặc hàng năm.
Được sử dụng để xác nhận tính nhất quán của thiết bị, chương trình và người vận hành.
Giám sát hàng ngày:
Nên sử dụng các chất chỉ thị hóa học cho mỗi chu trình khử trùng và nên xem lại bản đồ thông số quy trình.
Tần suất thử nghiệm chỉ thị sinh học có thể được giảm xuống khi thích hợp (chẳng hạn như hàng tháng hoặc hàng quý), nhưng những khu vực có quy định nghiêm ngặt có thể yêu cầu sử dụng từng đợt/chu kỳ.
Hồ sơ và Báo cáo Tài liệu (Bằng chứng Tuân thủ)
Tất cả các hoạt động giám sát và xác minh phải được ghi lại chính thức và báo cáo ít nhất phải bao gồm:
Thông tin thiết bị: Model và số máy phát điện VHP.
Thông tin thiết bị mục tiêu: Model tủ an toàn sinh học, số lượng, vị trí.
Thông số vòng lặp: đặt nồng độ mục tiêu, thời gian, nhiệt độ và độ ẩm, v.v.
Biểu đồ dữ liệu quy trình: đường cong thời gian tập trung của hoạt động thực tế, v.v.
Các chỉ tiêu hóa học: chủng loại, số lô, vị trí đặt, kết quả chuyển màu (có ảnh đính kèm).
Các chỉ tiêu sinh học: chủng, số lô, số lượng bào tử, vị trí đặt, kết quả nuôi cấy (đính kèm ảnh ống nuôi cấy).
Kết luận: Xác định rõ ràng liệu chu trình khử trùng có hiệu quả hay không.
Người thực hiện và ngày: Chữ ký của người điều hành và người phản biện.
bản tóm tắt
Khử trùng không tiệt trùng tương đương với không khử trùng.
Một hệ thống xác nhận đáng tin cậy để khử trùng bằng hydrogen peroxide và khử trùng tủ an toàn sinh học là:
Đảm bảo kiểm soát quy trình thông qua "ánh xạ thông số quy trình", đạt được sự công bố trực quan nhanh chóng thông qua "các chỉ báo hóa học" và cuối cùng đạt được chứng nhận hiệu quả cuối cùng về vi sinh thông qua "thử nghiệm thử thách chỉ báo sinh học".
Hệ thống xác nhận ba lần này là chìa khóa để nâng cao khả năng khử trùng bằng hydro peroxide từ "hoạt động" thành "khoa học" có thể theo dõi, tái sản xuất và đáng tin cậy, đồng thời cũng là nền tảng để đáp ứng các yêu cầu của GLP, GMP và chứng nhận phòng thí nghiệm an toàn sinh học trong và ngoài nước. Các nhà quản lý phòng thí nghiệm phải thực hiện điều này như một thủ tục bắt buộc và liên tục theo dõi nó.
